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層析柱的使用

更新時間:2018-01-25瀏覽:2020次
  關于層析柱裝柱、使用及相關注意事項
 
  (1)、裝柱前要仔細看填料的使用說明書,每種填料都有自己的特性,以及特殊的裝柱方法,針對不同的空柱,也要注意方法可能不同;
 
  3、這一點非常重要:裝柱包括以后使用中不允許柱內進入氣泡(bubble free),柱頭事先也要排除氣泡。
 
  (2)、填料要加水攪拌成均勻懸液,懸液濃度依填料而不同,一般70-85%,迅速倒入空柱內,或吸或壓,流速和具體步驟看說明書。
 
  (3)、所有柱子盡量做到填料均勻,尤其是用于凝膠層析的柱子。裝柱完成后,可用柱效測定的方法檢查裝填效果。一個裝填合格的柱子的理論塔板高度應是填料平均粒徑的2-4 倍,在此范圍內越小越好。
 
  (4)、選擇合適的泵,首先是流速滿足要求,脈沖盡量小。柱塞泵。
 
  (5)、準備上柱的液體應進行過濾,至少是0.45micrometre。
 
  (6)、關于純化,首先要考慮的是你的目標:純度、數(shù)量、速度、收率等等,再根據樣品的具體情況,尤其是目標蛋白的性質,確定純化策略。通常三步曲:capture、purification、polishing。*步先從大量或復雜樣品中將目標蛋白%26ldquo;抓出%26rdquo;,與主要雜質分離;再用高選擇性的層析去除絕大部分雜質;zui后精細純化,提供純度至設定目標。到實際工作中,不要死靠三步,也許一步也許四步或更多,具體情況具體分析。所謂%26ldquo;三步%26rdquo;只是一種思路而已。
 
  (7)、至于測序,我想大概不到1mg 應該足夠了。

聯(lián)系電話:
021-57155292

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